產(chǎn)品說明:
X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-吡喃半乳糖苷）是α-半乳糖苷酶（MEL1）的顯色反應(yīng)底物，更為常見的X-Gal是β-半乳糖苷酶（LacZ）的顯色反應(yīng)底物。α-半乳糖苷酶可水解無色的X-α-Gal底物，并生成藍(lán)色的產(chǎn)物。通過肉眼可見的藍(lán)白斑篩選，可快速而簡(jiǎn)便的識(shí)別陽(yáng)性克隆。
MEL1是GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)的一個(gè)報(bào)告基因，編碼外泌型的α-半乳糖苷酶。如果蛋白無互作，報(bào)告基因MEL1不表達(dá)，菌落呈乳白色；如果蛋白發(fā)生互作，報(bào)告基因MEL1表達(dá)，菌落呈藍(lán)色，亦可根據(jù)菌落藍(lán)色深淺，初步判斷蛋白互作強(qiáng)度。
X-α-Gal與缺陷型篩選平板同時(shí)使用，可有效提高篩選效率，排除假陽(yáng)性克隆，主要應(yīng)用于酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)GAL4酵母表達(dá)系統(tǒng)中蛋白互做的陽(yáng)性克隆的檢測(cè)。也可用于篩選含α-半乳糖苷酶基因細(xì)菌菌株；區(qū)分腸桿菌科內(nèi)的不同菌種，以及區(qū)分雙歧桿菌和乳酸菌；組織化學(xué)中用于酶活性的檢測(cè)等。
母液配制:
X-α-Gal母液（20 mg/mL）：取20 mg X-α-Gal溶于1 mL DMF，或等比例放大，過濾除菌。
使用方法:
涂布于預(yù)制平板：
1. 用DMF稀釋X-α-Gal母液至4 mg/mL?；蛉芙?4 mg X-α-Gal于6 mL DMF，終濃度為4 mg/mL。
2. 涂布200 μL（φ15 cm） 或者100 μL（φ10 cm）X-α-Gal儲(chǔ)存液于預(yù)制平板上；
3. 置于37 ℃培養(yǎng)箱至液體被吸收（DMF揮發(fā)性差，最長(zhǎng)可放4小時(shí)）；
4. 將轉(zhuǎn)化細(xì)菌或酵母涂于平板上，于37 ℃或30 ℃培養(yǎng)直至藍(lán)色菌斑出現(xiàn)。
直接加入培養(yǎng)基：
1. 將已滅菌固體培養(yǎng)基冷卻至50-55 ℃；
2. 100 mL固體培養(yǎng)基加入100-200 μL X-α-Gal母液混勻，快速倒平板。
攜帶MEL1基因的酵母菌株：
Y2HGold、Y190、AH109、Y187、PG69-2A。
儲(chǔ)存條件:
-20 ℃避光儲(chǔ)存，未開封有效期12個(gè)月。
